咖啡因与低剂量阿司匹林协同抑制结肠癌细胞生长的机制

doi:10.3969/j.issn.1674-5671.2016.06.01

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨咖啡因联合低剂量阿司匹林对结肠癌细胞生长增殖的抑制作用及其可能的机制。方法按照不同处理方式将人结肠癌细胞株Caco-2。SW-480。HT-29和HCT-116各分为4组:空白对照组。咖啡因单药组。低剂量阿司匹林组和咖啡因+低剂量阿司匹林组(联合用药组)。采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测凋亡相关关键因子p53。PTEN。EGFR和TNF-α mRNA的表达,免疫印迹法(western blot)检测凋亡相关蛋白p53。Cyt-C和caspase-9/-3剪切形式的蛋白表达情况,同时进行阿司匹林和咖啡因撤药实验。结果联合用药组较咖啡因单药组和低剂量阿司匹林组显著抑制细胞增殖,加速细胞早期凋亡。联合用药组各细胞株p53 mRNA表达量显著上调(P<0.05)。与空白对照组相比,咖啡因单药组。低剂量阿司匹林组和联合用药组目标蛋白p53。Cyt-C。caspase-9/-3剪切形式的表达量均上调,其中联合用药组差异最显著,具有统计学意义(P<0.05)。各组加入p53抑制剂后细胞活力水平均有不同程度提升,其中低剂量阿司匹林组和联合用药组的细胞活力水平提升最明显,差异有统计学意义(P<0.01)。阿司匹林撤药后,咖啡因维持可使结肠癌细胞活力持续抑制。p53持续相对高表达。结论咖啡因和低剂量阿司匹林联合可通过上调p53表达和激活caspase-9/-3凋亡通路抑制结肠癌细胞增殖和激活细胞凋亡,咖啡因能维持阿司匹林撤药后一定时效的抑癌效果。

关键词: 结肠肿瘤, 阿司匹林, 咖啡因, 细胞增殖, 协同作用

Abstract:

Objective This study aimed to investigate the synergistic effects of low-dose aspirin and caffeine for preventing colorectal cancer. Methods The colorectal cell lines Caco-2,SW-480,HT-29,and HCT-116 were exposed to low-dose aspirin alone,caffeine alone or both agents,then cell viability was measured using the cell counting kit-8 and extent of apoptosis was measured using flow cytometry. Expression of relevant factors(p53,PTEN,EGFR,TNF-α) was measured using real-time PCR. Drug-withdrawal experiments were conducted. Results Treating cell lines with both caffeine and aspirin inhibited cell proliferation and accelerated early apoptosis significantly more than treating cells with either agent alone. Western blotting showed that treating with aspirin alone caffeine alone and with the combination of aspirin and caffeine up-regulated p53,Cyt-C and caspase-9/-3 expression, and the difference of treatment with the combination of aspirin and caffeine was the most significant(P<0.05). The level of cell vitality were improved,when the p53-specific inhibitor pifithrin-α were added. In drug-withdrawal experiments, caffeine treatment prolonged p53 up-regulation and inhibition of proliferation. Conclusion Aspirin and caffeine synergistically inhibit proliferation and promote apoptosis of colorectal cancer cells. In addition, maintaining caffeine can prolong growth inhibition after aspirin withdrawal.

Key words: Colonic Neoplasm, Aspirin, Caffeine, Cell pvolifevation, Synergy

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