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中国癌症防治杂志

中国癌症防治杂志 ›› 2015, Vol. 7 ›› Issue (3): 196-200.doi: 10.3969/j.issn.1674-5671.2015.03.12

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人骨肉瘤细胞MG-63侧群细胞的分离及耐药性研究

  

  1. 广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科；广西医科大学医学科学实验中心
  • 出版日期:2015-06-25 发布日期:2015-07-13
  • 通讯作者: 钟艳平 943174896@qq.com
  • 基金资助:

    广西自然科学基金资助项目（No 2012GXNSFAA053134）；广西区域性高发肿瘤防治研究重点实验室项目（GK2014-ZZ17）

Isolation of side population cells from the MG-63 osteosarcoma cell line and characterization of their chemotherapeutic resistance

  • Online:2015-06-25 Published:2015-07-13

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摘要：

 目的 分选人骨肉瘤细胞MG-63中的侧群（side population，SP）细胞，并探讨SP细胞对化疗药物耐药的机制。方法 以流式细胞术仪检测、分选经DNA染料Hoechst 33342染色后MG-63中的SP细胞，采用CCK-8法检测顺铂对SP细胞与非侧群（non-SP）细胞的抑制率，并计算半数抑制浓度（IC50）。荧光定量 PCＲ法检测SP细胞和non-SP细胞中 MRP、XRCC1、MGMT、ABCG2 mＲNA 的表达水平。结果 MG-63 细胞在细胞密度为9×105个/ml、 Hoechst 33342 终质量浓度为5 μg/ml 时，MG-63 SP 细胞的比例最稳定，为（1.45±0.23）%，且细胞保持良好的活性。顺铂对SP细胞的IC50为11.608 μg/ml，对non-SP细胞的IC50为6.876 μg/ml，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。MRP、XRCC1 、MGMT 和ABCG2 mＲNA 在 SP细胞中的表达分别是non-SP 细胞的 1.58 倍、1.61倍、2.36倍和3.14倍（P<0.05）。 结论 人骨肉瘤MG-63细胞中存在SP细胞亚群，与non-SP细胞相比，SP细胞对顺铂的耐药性更为明显，可能与其耐药基因MRP、XRCC1 、MGMT、ABCG2 mRNA的高水平表达有关。

关键词: 骨肿瘤, 侧群细胞, 肿瘤干细胞, 耐药性

Abstract:

Objective To isolate side population（SP）cells and non-SP cells from the MG-63 human osteosarcoma cell line and investigate the mechanism behind SP cell resistance to chemotherapy. Methods MG-63 SP cells were isolated by flow cytometry using the blue fluorescent dye Hoechst 33342．Resistance of SP and non-SP cells to Cisplatin （DDP） were analyzed using the Cell Counting Kit-8，and 50% inhibitory concentration （IC50） was calculated for both subpopulations. Expression of MRP，XRCC1，MGMT and ABCG2 transcripts was assayed by RT-PCR in SP and non-SP cells. Results SP cells accounted for （1.45±0.23）% of MG-63 cells at a density of 9 × 105/ml after staining with 5 μg/ml Hoechst 33342. DDP showed an IC50 of 11.608 g/mL in SP cells，significantly higher than the value in non-SP cells（P<0.05）. Transcript levels were significantly higher in SP cells than in non-SP cells for MRP （1.58-fold higher），XRCC1 （1.61-fold），MGMT （2.36-fold） and ABCG2 （3.14-fold） （P<0.05）． Conclusion MG-63 human osteosarcoma cells contain SP cells， which show higher resistance to DDP than non-SP cells. Up-regulation of MRP，XRCC1，MGMT and ABCG2 in SP cells may play a role in this drug resistance.

Key words: Osteosarcoma neoplasm, Side population cell, Cancer stem cell, Drug resistance