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肝癌相关抗原H2-calponin基因重组质粒的构建与表达
范升龙,黄 朋,涂镇波,李 玲,张胜昌,陆巧巧,赵 赫,周素芳
2012 (4):
311-315.
doi: 10.3969/j.issn.1674-5671.2012.04.03
摘要
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目的 应用基因工程的方法构建H2-calponin(CNN2)基因工程表达质粒,体外表达、分离、纯化CNN2蛋白。方法 以PCR扩增CNN2 cDNA序列,用基因工程技术将CNN2基因重组到表达质粒pCold Ⅲ中,转化BL21(DE3)pLysS宿主菌,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis,SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达情况,优化表达条件,以较大体积培养基因工程菌,菌体经超声波破菌后,过Ni-NTA亲和柱纯化,Western-blot检测表达纯化的融合蛋白。结果 转化有pCold Ⅲ-CNN2重组质粒的基因工程菌能诱导表达CNN2蛋白,表达的目的蛋白占总菌体蛋白的35%;SDS-PAGE检测发现菌体上清液和沉淀物中均有目的蛋白片段,证实部分CNN2蛋白以可溶性形式表达;Western-blot检测结果提示表达纯化的蛋白能与抗CNN2抗体发生反应。结论 成功构建出表达可溶性CNN2蛋白的重组质粒,诱导表达的蛋白具有CNN2免疫原性。
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