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环广豆根素和山豆根查尔酮的分离鉴定及其抗卵巢癌活性研究
单体艳, 吕思慧, 陈曦, 梁金兰, 闫炳雄, 宋志军, 王琪
2025 (2):
156-163.
doi: 10.3969/j.issn.1674-5671.2025.02.05
摘要
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目的 从传统中药山豆根中筛选和鉴定新的抗卵巢癌活性分子,探讨其对卵巢癌细胞凋亡和自噬的影响。方法 山豆根中黄酮类成分采用硅胶柱层析、减压旋蒸等技术进行系统分离, 检测分离馏分抑制卵巢癌细胞生长的活性。高效液相色谱⁃质谱(high performance liquid chromatography⁃mass spectrometry,HPLC⁃MS)进行抑癌活性单体的表征鉴定,核磁共振氢谱(nuclear magnetic resonance,1H NMR)和电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)质谱进行结构确证。实时细胞分析(real⁃time cell analysis, RTCA)系统检测环广豆根素(Sophoranochromene)和山豆根查尔酮(Sophoradin)抑制6种卵巢癌细胞系(A2780、NIH:OVCAR3、SKOV3、Caov⁃3、Caov⁃4和ES⁃2)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的效果。网络药理学和分子对接技术预测活性单体与卵巢癌细胞的互作靶点,流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot分析细胞凋亡蛋白PARP、C⁃caspaes⁃3的剪切情况及自噬标志蛋白p62和LC3B的表达。结果 从山豆根抗卵巢癌有效馏分SdgfF中鉴定出抗卵巢癌的活性单体环广豆根素和山豆根查尔酮。RTCA系统证实这两种单体对6种卵巢癌细胞(A2780、NIH:OVCAR3、SKOV3、Caov⁃3、Caov⁃4和ES⁃2)的IC50值均低于IOSE80细胞(均P<0.0001)。流式细胞术结果显示这两种单体处理后A2780细胞凋亡率均明显上升(均P<0.05)。筛选获得10个环广豆根素⁃卵巢癌核心靶点,16个山豆根查尔酮⁃卵巢癌核心靶点。Western blot结果显示,环广豆根素处理后A2780细胞中凋亡相关蛋白C⁃PARP表达明显升高(P<0.05),山豆根查尔酮处理后p62表达明显下降而LC3BⅠ/Ⅱ表达明显升高(P<0.05)。结论 环广豆根素和山豆根查尔酮通过诱导卵巢癌细胞凋亡和自噬,有望开发为新的卵巢癌治疗剂。
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